药监局发布沉香化滞丸、半夏系列药材等五种药品的补充检验方法|2019
按照《中华人民共和国药品管理法》及其实施条例的有关规定，《沉香化滞丸中松香酸检查项补充检验方法》《半夏药材及饮片生半夏、法半夏、姜半夏、清半夏中水麦冬酸检查项补充检验方法》《妇舒丸中牛皮源成分检查项补充检验方法》《绿袍散中金胺O检查项补充检验方法》《三七粉中三七茎叶检查项补充检验方法》5项药品补充检验方法经国家药品监督管理局批准，现予发布。
国家药监局
2019年11月20日
附件1：沉香化滞丸中松香酸检查项补充检验方法（BJY 201919）
沉香化滞丸中松香酸检查项补充检验方法
（BJY 201919）
【检查】 松香酸 照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1%甲酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为241nm。理论板数按松香酸峰计应不低于2000。
|
时间（分钟）
|
流动相A（%）
|
流动相B（%）
|
|
0~30
|
60→70
|
40→30
|
|
30~35
|
70→65
|
30→35
|
对照溶液的制备（临用新制）取松香酸对照试剂适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含2µg的溶液，即得。另取11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含2µg的溶液，作为参照溶液。
供试品溶液的制备 取本品，研细，取2.0g，精密称定，精密加入乙醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取供试品溶液、对照溶液与参照溶液各20µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果判断 供试品色谱中，在与松香酸对照试剂溶液色谱峰保留时间相应的位置上不得出现相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不同（松香酸对照试剂色谱峰在241nm显示最大吸收）；若吸收光谱相同，且该色谱峰的峰面积大于11-羰基-β-乙酰乳香酸参照溶液色谱峰的峰面积值，则视为阳性检出。
备注：必要时，可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。（参考流动相为乙腈-0.1%甲酸系统）
起草单位：甘肃省药品检验研究院
复核单位：青海省药品检验检测院
附件2：半夏药材及饮片生半夏、法半夏、姜半夏、清半夏中水麦冬酸检查项补充检验方法（BJY 201920）
半夏药材及饮片生半夏、法半夏、姜半夏、清半夏中水麦冬酸检查项补充检验方法
（BJY 201920）
【检查】水麦冬酸 照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；采用二极管阵列检测器，检测波长为210nm，流速为每分钟0.8ml，柱温为25℃。理论板数按水麦冬酸峰计算应不低于3000。
|
时间（min）
|
流动相A（%）
|
流动相B（%）
|
|
0~40
|
1
|
99
|
|
40~45
|
1→10
|
99→90
|
|
45~50
|
10→1
|
90→99
|
|
50~60
|
1
|
99
|
对照品溶液的制备 （临用新制）取水麦冬酸对照品适量，精密称定，加乙腈-0.1%磷酸溶液（1:99）制成每 1ml 含 0.25μg 的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 取供试样品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水20ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml至50ml离心管中，加磷酸0.1ml，摇匀，加入乙酸乙酯20ml，摇匀，离心（转速为每分钟5000转），分取乙酸乙酯液，酸液再用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，减压回收溶剂至干，残渣加乙腈-0.1%磷酸溶液（1:99）使溶解，并定容至5ml（半夏及生半夏）或2ml（姜半夏、清半夏、法半夏），用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
结果判断 供试品溶液色谱中，在与水麦冬酸对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置上不得出现相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在190～400nm波长范围内紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。
备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法确证。建议采用甲醇-0.02%氨溶液（5:95）流动相系统。
起草单位：四川省食品药品检验检测院 成都中医药大学
复核单位：中国食品药品检定研究院
附件3：妇舒丸中牛皮源成分检查项补充检验方法（BJY 201921）
妇舒丸中牛皮源成分检查项补充检验方法
（BJY 201921）
【检查】牛皮源成分 照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）和质谱法（中国药典2015年版通则0431）测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3ml；采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），多反应监测（MRM），选择m/z 641.3（双电荷）→726.2和m/z641.3（双电荷）→783.3作为检测离子对。取牛皮源成分参比溶液，进样5μl，按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10：1。
|
时间（分钟）
|
流动相A（%）
|
流动相B（%）
|
|
0~25
|
5→20
|
95→80
|
|
25~40
|
20→50
|
80→50
|
牛皮源成分参比溶液的制备 取黄明胶对照药材0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液5ml，置100ml量瓶中，加阿胶基质溶液（取阿胶对照药材粉末0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，即得）稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1μl中含1μg的溶液，临用新制）10μl，摇匀，37℃恒温酶解12小时，即得。
供试品溶液的制备 取本品适量研细，取约含阿胶0.1g的供试品，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声30分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，自“用0.22μm微孔滤膜滤过”起，照牛皮源成分参比溶液的制备方法同法操作，即得。
测定法 分别吸取牛皮源成分参比溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。
判定原则 （1）供试品的提取离子流色谱中，未同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；（2）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 641.3（双电荷）→726.2的色谱峰面积值不大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；（3）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 641.3（双电荷）→726.2的色谱峰面积值大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为检出。
结果判定 供试品的提取离子流色谱中，应不得检出与参比溶液色谱相应的色谱峰。
起草单位：广东省药品检验所
复核单位：湖北省药品监督检验研究院
附件4：绿袍散中金胺O检查项补充检验方法（BJY 201922）
绿袍散中金胺O检查项补充检验方法
（BJY 201922）
【检查】金胺O 照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L乙酸铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长432nm。理论板数按金胺O对照品色谱峰中主峰计算，应不低于2000。
|
时间（分钟）
|
流动相A（%）
|
流动相B（%）
|
|
0～5
|
90→80
|
10→20
|
|
5～20
|
80→30
|
20→70
|
|
20～30
|
30→90
|
70→10
|
对照品溶液的制备 取金胺O对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品内容物1.0g，加甲醇50ml，超声处理20分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果判断 供试品色谱中，应不得出现与金胺O对照品色谱主峰保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在220～700nm波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。
备注：必要时，可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。
起草单位：连云港市食品药品检验检测中心
复核单位：江苏省食品药品监督检验研究院
附件5：三七粉中三七茎叶检查项补充检验方法（BJY 201923）
三七粉中三七茎叶检查项补充检验方法
（BJY 201923）
【检查】三七茎叶 取本品0.1g，置试管中，加水合氯醛试液2ml，加热透化，摇匀，取混悬液1滴，置载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜100倍下，参照下图位置，随机选取9个检查点检视。视野不得检出以下植物组织：叶肉组织，叶肉组织由类圆形薄壁细胞组成，含叶绿体。
如仅有1个检查点视野中检出上述植物组织，应依法制片复试，复试不得检出。
人参皂苷Rb3 照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶（色谱柱内径2.1mm）为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为0.4ml/min；检测波长为203nm；柱温为30℃。理论板数按人参皂苷Rb3峰计算应不低于10000。
|
时间（分钟）
|
流动相A（%）
|
流动相B（%）
|
|
0～9
|
18→20
|
82→80
|
|
9～20
|
20→40
|
80→60
|
对照品溶液的制备 取人参皂苷Rb3对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品0.6g，精密称定，精密加入80%甲醇50ml，称定重量，置80℃水浴上加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µl，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图。
结果判断 供试品色谱中，应不得出现与人参皂苷Rb3对照品色谱保留时间相同的色谱峰。
起草单位：河北省药品检验研究院
复核单位：山东省食品药品检验研究院
中食药信息网